- In vitro αξιολόγηση της πιθανής κυτταροτοξικότητας και της βιοδραστικότητας επιλεγμένων κλασμάτων μικροφυκών σε ανθρώπινα πρωτογενή δερματικά κύτταρα (ινοβλάστες και κερατινοκύτταρα)
Για τον προσδιορισμό της τοξικότητας και της βιοδραστικότητας των εκχυλισμάτων από τα παραγόμενα στελέχη μικροφύκών πραγματοποιήθηκε in vitro δοκιμή σε ανθρώπινες κυτταροσειρές. Πιο συγκεκριμένα, για το σκοπό αυτό αναπτύχθηκε πρωτόκολλο καλλιέργειας ανθρώπινων δερματικών κυττάρων, ινοβλαστών (NHDF-Ad – Human Dermal Fibroblasts, Adult). Στην κυτταροσειρά αυτή εφαρμόστηκαν επιλεγμένα εκχυλίσματα μικροφυκών σε συγκεκριμένες συγκεντρώσεις και προσδιορίστηκε η in vitro κυτταροτοξικότητα τους.
Επόμενος στόχος ήταν να εκτιμηθεί η πιθανή βιοδραστικότητα των εκχυλισμάτων των μικροφυκών υπό την επίδραση οξειδωτικού στρες. Αρχικά προσδιορίστηκε με τη μέθοδο ΜΤΤ μια συγκέντρωση υπεροξειδίου που προκαλεί ήπια κυτταροτοξικότητα στην ανθρώπινη κυτταρική σειρά NHDF. Στη συνέχεια εφαρμόστηκαν στην κυτταροσειρά συγκεκριμένες συγκεντρώσεις εκχυλισμάτων για 24 και 48 ώρες και μετρήθηκε εκ νέου η βιωσιμότητα τους με τη μέθοδο ΜΤΤ. Επίσης, προκειμένου να εκτιμηθεί η μεταγραφική επίδραση των εκχυλισμάτων στην κυτταρική σειρά NHDF χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος της αντίστροφης μεταγραφής ακολουθούμενη από ποσοτική PCR (RT-qPCR) με σκοπό τη μελέτη των σχετικών επιπέδων έκφρασης επιλεγμένων γονιδίων που εμπλέκονται σε αποκρίσεις οξειδωτικού στρες και άλλους μηχανισμούς. Τέλος προσδιορίστηκε και η επουλωτική δράση των επιλεγμένων εκχυλισμάτων.